有人問(wèn)：為什么有的人在做間接Elisa法測(cè)試小鼠血清中的IgE抗體，設(shè)空白對(duì)照、和陰性對(duì)照、陽(yáng)性血清稀釋倍數(shù)為5千、1萬(wàn)、10萬(wàn)、20萬(wàn)不等，用的是生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgE抗體，ELISA試劑盒和親和素的辣根過(guò)氧化物酶。可是結(jié)果除了空白對(duì)照孔沒(méi)有顏色外，其余各孔全有顏色，而且OD值都相差不大，為什么?
 

技術(shù)回答：可能原因如下：
(1) 水質(zhì)被金屬離子等污染;防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水。
(2) 洗滌不充分，樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗滌液應(yīng)注滿微孔，充分洗滌。
(3) 移液頭重復(fù)使用，ELISA試劑盒未洗凈或消毒不*; 防止辦法移液頭一次性使用。
(4) 酶標(biāo)板靈敏度過(guò)高。
(5) 一抗顯色時(shí)間的控制等等，關(guān)于ELISA的每一步都要注意才行。

有人問(wèn)：ELISA加樣時(shí)的防錯(cuò)小經(jīng)
 

技術(shù)回答：
(1)用一張寫滿字的紙，字越多越好，ELISA試劑盒比如報(bào)紙，墊在下面，這樣，加過(guò)標(biāo)本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì)變小，沒(méi)加的字正常，非常容易區(qū)分。
(2)可以利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以區(qū)別。
(3)在標(biāo)本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產(chǎn)生小氣泡，也可以加以區(qū)分。